Fisher細胞爬片的組織取材與制作方法

1、腦組織和神經組織應采用灌注固定后，再進行后固定。

2、組織取材注意事項：

（1）標本新鮮：組織要求離體后30min~2h內浸入固定液，尤其是開展分子生物學工作。動物組織取材要求心臟還在跳動時取材。

（2）注意防止人為因素的影響刀和剪要快，避免擠壓。

（3）組織塊的大小 厚為0.1~0.3cm，大小可根據需要而定。

Fisher細胞爬片的制作方法

1.爬片可用一般的蓋玻片，也可用爬片。

2.應用蓋玻片，可根據自己的需要剪裁成合適的大小，以備置于6孔板、12孔板或24孔板；裁剪時可用前護士輸液用于打開玻璃安瓶的小沙輪，或者是口腔科的那種小沙輪，輕輕劃一下后，稍用力一掰就分開了。如果接種大皿的話，一般不將蓋玻片切開，直接清潔后放入培養皿中，到染色時再將之切開，這樣既保證了細胞均一性，又可同時做幾個指標的染色。

3.將剪裁好的爬片，置于濃硫酸中浸泡并過夜，第二天先用自來水沖洗20遍，再置于無水酒清中浸泡6小時，再用三蒸水沖洗3遍，放在飯盒或者玻璃培養皿中烘干后進行高壓消毒。

4.高壓后取出放入烤箱中烤干，備用。烤干后可放入超凈臺中。

5.關于多聚賴氨酸，很多人都將玻片用此處理，以使細胞與玻片結合更牢。但我在做爬片時從來沒用過多聚賴氨酸，細胞貼壁仍然很好，且在做后續的免疫細胞化學染色、tunel等凋亡檢測、免疫熒光等也從未脫過片。